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Leica Stellaris是点扫描激光共聚焦显微镜,以激光为光源,通过对样品表面的逐点扫描,样品被激发之后的发射光通过针孔,到达检测器,从而屏蔽了样品非焦平面信号产生的背景,实现高分辨率成像。
适用于固定细胞或组织切片的荧光染色,多色荧光成像、活细胞成像以及光谱扫描成像,该仪器配备了485-685nm连续光谱激光器,能够在这个范围内提供任意波长的激光,实现5-7色成像,并观察近红外波段样品信号。TauSense功能,即时获得基于荧光寿命的信息,实现荧光寿命拆分(去除背景荧光、多组分拆分)。FLIM荧光平均到达寿命检测功能,能够进行FLIM-FRET实验。全光谱扫描和光谱拆分(精度1nm),以及激发-发射光谱扫描。
(1)显微镜:全电动DMi8倒置荧光显微镜
(2)激光器:
固体激光器:405nm激光器;488nm激光器;561nm激光器;638nm激光器;
白光激光器:激发谱线485-685nm连续可调,8通道AOTF调节激光强度,最多可同时发射出8根激发谱线。
(3)物镜:
10×干镜,数值孔径0.4,工作距离2.56mm
20×干镜,数值孔径0.75,工作距离0.62mm
40×水镜,数值孔径1.10,工作距离0.62mm
63×油镜,数值孔径1.40,工作距离0.14mm
100×油镜,数值孔径1.40,工作距离0.13mm
(4)扫描单元及检测器:4个HyD S高灵敏荧光检测器, 1个PMT明场成像检测器,可同时四通道荧光成像和一个透射光明场成像。每一个荧光检测器均可以进行光谱扫描,410-850nm连续分光光谱接收调节,光谱调节分辨率1nm。扫描速度10幅/秒(512×512像素)及131幅/秒(512×16像素)。共振扫描头:扫描速度28幅/秒(512×512像素)及290幅/秒(512×16像素)。单视野扫描分辨率:最高8192×8192。
(5)扫描视野22mm,光学变倍范围0.75×-48×,调焦行程12mm,最小电子步进3.8nm;焦面实时追踪功能,防止焦点漂移(AFC)。
(6)活细胞培养装置:可控制温度和CO2浓度,自混气范围5-20%,样品可控温度范围30-40度,兼容35mm培养皿,多孔板,同时配备大型温控箱。
(7)图像处理软件:LAS X,含3D可视化、共定位分析,细胞计数、细胞器识别、光谱拆分,FLIM-FRET,FRAP,荧光寿命检测模块。